Use of a Sendai virus-based vector for efficient transduction of pinniped fibroblasts

Получение индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (ИПСК) млекопитающих расширило возможности изучения плюрипотентности и раннего эмбрионального развития. В литературе описаны ИПСК собаки (Canis lupus familiaris) и снежного леопарда (Panthera uncia), представителей отряда Carnivora. Ранее нами получены ИПСК американской норки (Neovison vison). Целью настоящего исследования был поиск условий для репрограммирования фибробластов ластоногих - представителей каноидной (Caniformia) ветви Хищных с консервативными геномами. Для создания ИПСК можно использовать различные системы доставки репрограммирующих транскрипционных факторов (РНК, белки, плазмиды, векторы на основе вирусов и др.). Наиболее эффективные системы доставки для клеток мыши и человека основаны на применении различных вирусных векторов. Мы сравнили две системы доставки репрограммирующих факторов: встраивающиеся в геном лентивирусные векторы и вектор на основе вируса Сендай - CytoTune EmGFP Sendai Fluorescence Reporter. Преимущества векторов на основе вируса Сендай по сравнению с лентивирусами - отсутствие встройки в геном. Проведено тестирование доставки генетических конструкций, кодирующих флуоресцентный белок, на культурах фибробластов семи видов ластоногих: северного морского котика (Callorhinus ursinus), северного морского льва (Eumetopias jubatus), моржа (Odobenus rosmarus), морского зайца (Erignathus barbatus), байкальской нерпы (Pusa sibirica), кольчатой нерпы (Phocahispida) и пестрой нерпы (Phocalargha). В качестве контроля были трансдуцированы фибробласты американской норки (N. vison), человека (Homo sapiens) и мыши (Mus musculus). Мы показали, что система трансдукции на основе вируса Сендай обеспечивает уровень экспрессии трансгена на один-два порядка выше, чем при использовании лентивирусов при сходном числе вирусов на клетку. Кроме того, экспрессия трансгена при применении вектора на основе вируса Сендай достаточно стабильна и незначительно изменяется на четвертый день трансдукции по сравнению со вторым днем. Полученные данные позволяют предположить, что трансдукция фибробластов ластоногих с помощью вируса Сендай предпочтительна для получения ИПСК ластоногих