Can Recombinant Tree Shrew (Tupaia belangeri chinensis) Chymosin Coagulate Cow (Bos taurus) Milk?

Впервые получен и частично охарактеризован генно-инженерный химозин тупайи (Tupaia belangeri chinensis). Целевой фермент нарабатывали в системе экспрессии Escherichia coli, штамм BL21(DE3). Показано, что рекомбинантный химозин тупайи коагулирует молоко коровы (Bos taurus). Общая и удельная молокосвертывающая активность полученного фермента составила 0.7-5.3 IMCU/мл и 8.8–16.6 IMCU/мг. Неспецифическая протеолитическая активность генно-инженерного химозина тупайи по отношению к суммарному казеину коровы оказалась на 30 и 117% выше, чем у рекомбинантных химозинов коровы и одногорбого верблюда соответственно. Обнаружено, что по сравнению с большинством известных генно-инженерных химозинов, фермент тупайи проявлял исключительно низкую термостабильность. После прогревания при 45°С коагуляционная способность рекомбинантного химозина тупайи падала более чем на 40%, а при 50°С фермент терял >90% исходной молокосвертывающей активности. Константа Михаэлиса (Km), число оборотов фермента (kcat) и каталитическая эффективность (kcat/Km) для рекомбинантного химозина тупайи, составили соответственно 6.3 ± 0.1 мкМ, 11927 ± 3169 с–1 и 1968 ± 620 мкM–1 с–1. Сравнительный анализ показал, что первичная структура химозин-чувствительного участка каппа-казеина коровы и предполагаемой аналогичной последовательности каппа-казеина тупайи различались на 75%. Способность рекомбинантного химозина тупайи свертывать молоко коровы наряду с низкой термостабильностью и высокой каталитической эффективностью по отношению к субстрату, имитирующему химозин-чувствительный участок коровьего каппа-казеина, позволяют предполагать, что этот фермент представляет потенциальный интерес для сыроделия.