Определение сравнительной активности ключевых ферментов эксцизионной репарации оснований в клеточных экстрактах

Ольга Алексеевна Кладова, Данила Алексеевич Яковлев, Regina Groisman, Alexander A. Ishchenko, Murat K. Saparbaev, Ольга Семеновна Федорова, Никита Александрович Кузнецов

Результат исследования: Научные публикации в периодических изданияхстатьярецензирование

Аннотация

Поврежденные азотистые основания ДНК удаляются в процессе эксцизионной репарации оснований. Этот ферментативный процесс начинается с действия одной из ДНК-гликозилаз, которые находят и удаляют поврежденные гетероциклические основания путем гидролиза N-гликозидных связей с образованием апуринового/апиримидинового сайта (AP-сайта). Затем апуриновая/апиримидиновая эндонуклеаза APE1 гидролизует фосфодиэфирную связь с 5′-стороны от АР-сайта с образованием одноцепочечного разрыва в ДНК. Снижение функциональной активности отдельных ферментов BER связано с повышенным риском развития сердечно-сосудистых, нейродегенеративных и онкологических заболеваний. В данной работе проведена разработка и апробация метода флуоресцентного анализа для измерения активности ключевых ДНК-гликозилаз и AP-эндонуклеазы человека в клеточных экстрактах. Эффективность флуоресцентных ДНК-зондов проверяли с помощью очищенных ферментов. Перспективные конструкции зондов были испытаны для определения активности ферментов в экстрактах клеточных линий A549, MCF7, HeLa, WT-7, HEK293T и HKC8. Показано, что общий уровень активности ферментов, отвечающих за репарацию АР-сайтов, удаление урацила и 5,6-дигидроурацила, был выше в линиях раковых клеток по сравнению с нормальной линией клеток почек человека HKC8.
Язык оригиналарусский
Страницы (с-по)556-566
Число страниц11
ЖурналБиохимия
Том85
Номер выпуска4
DOI
СостояниеОпубликовано - 2020

ГРНТИ

  • 31 ХИМИЯ

Цитировать