Here and there: the double-side transgene localization

Переведенное название: Здесь и там: двусторонняя локализация интеграций трансгена

P. A. Salnikov, A. A. Khabarova, G. S. Koksharova, R. Mungalov, P. S. Belokopytova, I. E. Pristyazhnuk, A. R. Nurislamov, P. Somatich, M. M. Gridina, V. S. Fishman

Результат исследования: Научные публикации в периодических изданияхстатьярецензирование

Аннотация

Полногеномные скрининговые методы, основанные на случайной интеграции экзогенных генетических конструкций, - новейший класс инструментов, открывающий возможности для изучения широкого спектра геномных процессов. Данный подход уже был применен к функциональному аннотированию генов млекопитающих, скринингу приспособленности бактерий, определению сайтов связывания факторов транскрипции, идентификации регуляторных генетических элементов и исследованию хромосомного эффекта положения. Все эти эксперименты требуют точной локализации трансгенов в геноме. Существующие на сегодняшний день методы картирования, такие как Inverse-PCR, TLA, splinkerette PCR и LAM-PCR, не позволяют одновременно определять оба участка генома, фланкирующие одну интеграцию трансгена, что ограничивает применимость подходов, в том числе связанных с хромосомной инженерией. В настоящей работе мы предлагаем метод, с помощью которого можно преодолеть это ограничение. Разработанная технология основана на фрагментации геномной ДНК, не затрагивающей интеграции трансгена. Это достигается путем исключения из последовательности вектора сайтов узнавания одного или нескольких ферментов рестрикции. Затем, как и в Inverse-PCR, были закольцованы молекулы лигированием в разбавленной смеси и секвенированы. Полученные данные дают возможность с высокой точностью идентифицировать перестройки и отделить их от артефактов лигирования, и, кроме того, отследить события транслокаций между интеграциями трансгенов. Это может быть использовано в экспериментах по изучению индуцируемых хромосомных перестроек. Для доказательства применимости метода мы с его помощью картировали интеграции транспозона Sleeping Beauty в клетки человека линии Hap1. Картированные интеграции были валидированы с помощью ПЦР-анализа. В статье приведен ряд рекомендаций для практического использования этого метода в экспериментах по множественной локализации интеграций трансгенных конструкций.
Переведенное названиеЗдесь и там: двусторонняя локализация интеграций трансгена
Язык оригиналаанглийский
Номер статьи1
Страницы (с-по)607-612
Число страниц6
ЖурналVavilovskii Zhurnal Genetiki i Selektsii
Том25
Номер выпуска6
DOI
СостояниеОпубликовано - 2021

Предметные области OECD FOS+WOS

  • 1.06 БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИ

ГРНТИ

  • 34 БИОЛОГИЯ

Fingerprint

Подробные сведения о темах исследования «Здесь и там: двусторонняя локализация интеграций трансгена». Вместе они формируют уникальный семантический отпечаток (fingerprint).

Цитировать