Аннотация
Казеины - это основные молочные белки, которые играют важную эволюционно консервативную роль в питании. Вариации последовательности казеиновых генов влияют на состав молока у животных. Регуляторные элементы казеиновых генов можно использовать для управления экспрессией желаемых трансгенов в молоке трансгенных животных. Десятки аллелей казеина идентифицированы у коз, коров, овец, верблюдов и лошадей, и эти варианты связаны с измененной экспрессией генов и содержанием молочного белка. Большинство известных мутаций, влияющих на экспрессию генов казеина, находится в промоторных и 3’-нетранслируемых областях. Мы выполнили пронуклеарные микроинъекции с мРНК Cas9 и sgRNA против первого кодирующего экзона гена Csn1s1 мыши, чтобы ввести случайные мутации в последовательность сигнального пептида α-казеина ( Csn1s1 ) в начале гена мыши. Секвенирование мышей-основателей по Сэнгеру выявило 40 мутаций. Как и ожидалось, мутации группировались вокруг сайта разреза sgRNA (3 п. н. от PAM). Большинство мутаций представляют собой небольшие делеции (1-10 п. н.), но мы также обнаружили несколько более крупных делеций (100-300 п. н.). Функционально большинство мутаций приводило к нокаутам генов из-за сдвига рамки считывания или потери стартовых кодонов. Некоторые из мутаций представлены инделами в рамке считывания в первом кодирующем экзоне. Из них мы описываем новый гипоморфный аллель Csn1s1 ( Csn1s1 c.4-5insTCC). Мы измерили уровни белка Csn1s1 и подтвердили, что мутация отрицательно влияет на состав молока, который показывает снижение экспрессии гена на 50 % и уменьшение количества белка Csn1s1 на 40-80 % по сравнению с аллелем дикого типа. Мы предположили, что мутация влияет на стабильность транскрипта или сплайсинг по неизвестному механизму. Эта мутация потенциально может служить генетическим маркером низкой экспрессии Csn1s1.
Переведенное название | Гипоморфная мутация гена Csn1s1 мыши, полученная пронуклеарной микроинъекцией CRISPR/Сas9 |
---|---|
Язык оригинала | английский |
Номер статьи | 10 |
Страницы (с-по) | 331-336 |
Число страниц | 6 |
Журнал | Vavilovskii Zhurnal Genetiki i Selektsii |
Том | 25 |
Номер выпуска | 3 |
DOI | |
Состояние | Опубликовано - мар 2021 |
Ключевые слова
- Casein
- CRISPR
- Hypomorphic mutation
- Pronuclear microinjection
Предметные области OECD FOS+WOS
- 4 СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫЕ НАУКИ
- 1.06 БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИ
- 4.01 СЕЛЬСКОЕ ХОЗЯЙСТВО, ЛЕСОНОЕ ХОЗЯЙСТВО, РЫБНОЕ ХОЗЯЙСТВО
- 1.06.KM ГЕНЕТИКА И НАСЛЕДСТВЕННОСТЬ
ГРНТИ
- 34 БИОЛОГИЯ